Justin Timberlake, hijo de Randall Timberlake y Lynn Bomar, nació en Memphis, Tennessee. Su abuelo paterno, Charles L. Timberlake, era un ministro de la Iglesia Bautista, por lo que a Justin le fue inculcada esa religión (aunque él se considera “más espiritual que religioso”, sigue siendo cristiano).

Sus padres se divorciaron en el año 1985 y ambos se han vuelto a casar. Su madre, que ahora dirige una compañía de entretenimiento llamada Just-in Time Entertainment, se casó con el banquero Paul Harless cuando Justin tenía 5 años de edad. Su padre, un director de coro en una Iglesia Bautista, tiene dos hijos con su actual esposa Lisa: Jonathan y Stephen, nacidos en 1993 y 1998, respectivamente. Laura Chwieseni, una hermanastra de Justin, murió justo tras nacer en 1997 y fue mencionada por él como “mi ángel en el cielo” en la sección de agradecimientos de uno de sus álbumes